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其中δ为显微镜的分辨率;λ为照明光线的波长;NA为物镜的数值孔径)。但当所观察的荧光标本稍厚时,传统荧光显微镜一个难以克服的缺点就显现出来:焦平面以外的荧光结构模糊、发虚。原因是大多数生物学标本是层次区别的重叠结构(如耳蜗基底膜。其实是外毛细胞、多种支持细胞、神经纤维等组成的空间结构),,在普通光学显微镜下聚焦平面的变化,会表现出不同的形态。假若荧光标记的结构在不同层次上都有分布,且重叠在一起,反射荧光显微镜(epifluorescentmicroscope)不*从焦平面上收集光量,而且来自焦平面上方或下方的散射荧光也被物镜所接收,荧光显微镜的光学分辨率就要**降低。在传统光学显微镜基础上,激光扫描共聚焦显微镜用激光作为光源,采用共轭聚焦原理和装置,并利用计算机对所观察的对象进行数字图像处理观察、分析和输出。其特点是可以对样品进行断层扫描和成像,进行无损伤观察和分析细胞的三维空间结构[3]。同时,利用免*荧光标记和离子荧光标记探针,该技术不*可观察固定的细胞、**切片,还可以对活细胞的结构、分子、离子及生命活动进行实时动态观察和检测。在亚细胞水平上观察诸如Ca2+,pH值,膜电位等生理信号及细胞形态的变化。上海定制超景深显微镜
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